Assayquant简介
AssayQuant的混合读取PhosphoSens™检测平台是基于从麻省理工学院(MIT)独家授权的多项专利的创新技术。该平台使用优化的肽或蛋白质底物中的磺胺基氧(Sox)色基,当其在激酶、ATP和Mg2+存在下被磷酸化时,使用螯合增强荧光(CHEF)产生荧光信号。其结果是一种简单而强大的方法,使用常见的微板读数器以均匀和连续(动力学)的形式测量蛋白激酶活性,其荧光的水平与磷酸化产物的数量成正比。该技术是阐明药物作用机制的理想方法,并可在整个药物开发过程中使用广泛的样品,包括纯化的酶和粗制的细胞或组织裂解物,并能够在微尺度上进行组织诊断,是辅助诊断的重要手段之一。
Sox技术测量蛋白激酶活性的工作流程:
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选择PhosphoSens 平台的8大理由:
1, 革命性的:唯一
独家专利技术:允许连续的动力学读数 (PhosphoSens®, 荧光强度 , 荧光强度。Ex/Em 360/485 nm)或终点 (PhosphoSens -Red,时间分辨 荧光,Ex/Em 360/620 nm) 单个传感器的单一检测的检测。
2, 简单:
只需一步”add and read”。
3, 直接定量:
4, 荧光信号是一种直接读值 且可以通过标准曲线反推μM/min。
5, 高通量:适用于96,384 或 1536 孔板体系
6, 优化的:
检测化合物和底物;强大的PhosphoSens® 方法开发可预见的成功率高,即使是那些对蛋白质底物要求高的难开发靶点。
7, 通用性:兼容任何ATP浓度或样品类型 (重组蛋白,IP-激酶,细胞 或组织裂解物)且可在任何标准具有 荧光通道的多孔板酶标仪读数。
8, 可靠性:精确度高,数据强大(Z'>0.7), 出色的批件一致性。
9, 快速:数天或数周内可实现新产品方法开发且测试时间短(非手动)。
数据展示:
丝氨酸-苏氨酸和酪氨酸激酶动力学测试方法:
PhosphoSens®平台拥有270多种基于以CSox多肽为底物的丝氨酸-苏氨酸和酪氨酸激酶以及特定的疾病相关的突变体的试验。
优点:
1, 为激酶(pM-nM),底物,ATP 提供了宽浓度线性范围。
2, Km app 以及抑制剂活性值与其他 平台一致,但时间更短。
3, 能够鉴定及分析所有种类的 抑制剂:ATP竞争性,变构, 底物竞争性,可逆和共价。
4, 共价结合抑制剂停留时间和 分析的理想选择。
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EGFR野生型及突变体激酶活性:
EGFR(T790/L858R)激酶线性:
EGFR及EGFR(T790/L858R)突变抑制剂稀释:
新技术:蛋白磷酸酶
PhosphoSens® data for SHP-1 and SHP-2:
PhosphoSens® data for PTP1B:
PhosphoSens® -Red
使用同一种已优化的CSox底物为蛋白激酶和磷酸酶同时提供动力学和终点法测试。
终点法分析利用铕的直接敏化 作用并利用200微秒延迟获取 的时间分辨数据来捕获620nm 处的荧光 - 从而消除背景荧光。
定制服务:
除此之外,PhosphoSens已建立了一种快速且系统的方法,提供具有高活性和适合动力学参数的PhosphoSens 底物。
基于激酶家族的已知内源性序列开始,我们会从我们内部超过16000个多肽sensor的Panel中确定出多个候选序列(里程碑1)。
里程碑1:筛选内部专有的CSox库,来确定主导序列
候选序列可经过2轮文库筛选而进行优化 (里程碑2和3)。
里程碑2:在各可变位点使用单氨基酸替换的方法来优化序列
里程碑3:将各位点的偏爱性替换进行整合
可根据客户的需求执行额外的里程碑来开发专门针对未纯化细胞裂解物样品的高选择性的方法。